产品货号：
BTN15-109
中文名称：
火鸡源性成分荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Turkey-Derived Material Probe PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是为满足这一需求根据探针法qPCR原理开发的试剂盒，可用于检测食品或其他材料中是否有火鸡的成分。
现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、qPCR反应参数
五、数据处理
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现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 根据火鸡保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的火鸡成分，但不能检测其他非火鸡成分。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 快速，整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为2.0小时。
- 对混合样品中火鸡成分的检测下限为0.01%，对样品中火鸡成分的核酸检测下限为0.1ng/μL。
- 本产品只能用于科研，足够50次20μL体系的荧光定量PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 火鸡源性成分探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 火鸡源性成分探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/uL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL阳性对照(浓度为1×108拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的核酸释放剂试用装，则请到www.bjbalb.com输入产品名称核酸释放剂或货号：BTN61202下载手册并按手册操作，制备样品。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品(也充当PCR阳性对照)。如果做2～3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管标准曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 火鸡源性成分探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/uL) 1μL 1μL 各2μL 火鸡源性成分探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 7μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各7μL
四、qPCR反应参数
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(35个循环)94℃ 0.5min 60℃ 0.5min(采集FAM通道的荧光信号) 72℃ 0.5min 最后延伸 72℃ 10min
五、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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